Для нормального перебігу процесу реплікації потрібні тимідилові нуклеотиди, синтез яких відбувається за участю тимідилатсинтетази, в якості коферменту використовується:

ДНК складається з чотирьох літер: А, Г, Ц, Т (Тимін). РНК складається з: А, Г, Ц, У (Урацил). Хімічно Тимін — це те саме, що й Урацил, тільки з пришитою метильною групою (−CH3). Щоб клітина могла поділитися (реплікація), їй треба перетворити урациловий нуклеотид (dUMP) на тимідиловий (dTMP). Фермент Тимідилатсинтетаза виконує цю роботу: він бере dUMP і "приклеює" до нього метильну групу (її донором є активна форма Фолієвої кислоти (В9) — а саме Метилентетрагідрофолат. Він віддає свій вуглець, перетворюючись на дигідрофолат). Без цього процес синтезу ДНК зупиняється.
Тіаміндифосфат (В1): відповідає за декарбоксилювання кетокислот (енергетичний обмін).
Карбоксибіотин (В7/Н): відповідає за приєднання CО2 (карбоксилювання).
Піридоксальфосфат (В6): головний в обміні амінокислот (трансамінування).
НАД (В3/РР): переносник електронів та протонів в окисно-відновних реакціях.